二代DNA建库

　　我们目前提供的DNA建库测序服务有：

• 全基因组建库测序（人、植物、动物、微生物、病毒）
• 人全外显子组建库测序
• Multi-PCR产物建库测序
• RRBS甲基化建库测序
• WGBS甲基化建库测序
• ChIP建库测序

　　

　　文库构建的起始样品可以是任何来源的双链(ds) DNA：基因组DNA、BACs、PCR扩增物、ChIP样本、任何类型的RNA转化的ds cDNA (mRNA、均一化的总RNA)等。首先dsDNA进行片段化，平均片段长度不超过600bp，片段化的dsDNA末端修复后末端加'A'再连接Adapter/Index，最后进行PCR扩增和片段筛选，经纯化后完成文库构建。我们会对文库进行QC，符合要求的文库方可上机测序。建库流程整体类似，不同文库类型在建库细节方面可能会有所不同。

　　提交符合要求的样品是文库构建成功和获得高质量测序数据的关键，因此请确保您的样品符合纯度、浓度要求。如因样品问题而建库失败将影响您样品的实验进度。

　　对于大批量样本，我们可以提供贝克曼Biomek FXP自动化工作站进行高通量自动化建库。

　　

　　如果您需要二代DNA建库测序服务，请确定您的样品：

1. 所有样品须附有胶图（Bioanalyzer 2100、Fragment Analyzer 5200或琼脂糖凝胶电泳图其一即可）、NanoDrop OD 260/280值和260/230值、Qubit浓度定量。我们接收样品后会再次QC，不符合要求的样品将被退回。
2. DNA样本需要确保无RNA污染(可在胶图中检查)，溶解在EB缓冲液、TE缓冲液或ddH₂O中，置于1.5ml低吸附离心管中用封口膜封好，用记号笔或标签清晰、准确地标记样品编号，内容应与《样品信息单》一致。
3. 请在《样品信息单》中准确填写样品浓度、体积、建库类型等信息。
4. 基因组DNA需完整、无降解，所有样品必须有足够的多样性。样品完整性、多样性越好，后期的文库质量和数据质量更高。
5. 全基因组、外显子、Multi-PCR产物、RRBS和WGBS建库的最低起始量为100ng，体积最少15μl；ChIP建库的最低起始量为1ng，体积最少10μl。

　　

　　核酸定量均以Qubit定量为准，如为Nanodrop定量，则需按两倍量提交。样本起始量越高，越有利于提高文库的多样性，因此在条件允许情况下，请尽量多提交样本。基因组DNA要求完整、无降解，无蛋白质，无肉眼可见的杂质污染，琼脂糖凝胶电泳图中，基因组 DNA 主带应在λ‐Hind III digest DNA marker 最大条带 23 Kb 以上且主带清晰，无弥散。如果是Bioanalyzer 2100或Fragment Analyzer 5200质检，GQN值应大于7。DNA样本NanoDrop OD 260/280值应在1.8至2.0之间，260/230值应高于2.0。

　　样品如需长期保存，请置于-20℃低温冷冻箱内。为防止样品降解对测序的影响，我们接受的 DNA 样品冻存时间不超过三个月。

　　

　　二代RNA建库

　　我们目前提供的RNA建库测序服务有：

• RNA转录组建库测序（polyA选择）
• RNA转录组建库测序（rRNA去除）
• 链特异RNA建库测序
• Small RNA建库测序

　　

　　Total RNA样本中核糖体RNA (rRNA)序列高达90%，mRNA通常只占Total RNA的1 - 2%，可通过 poly-T oligos磁珠富集mRNA，或rRNA-depletion方法去除rRNA，这样可以获取更高比例的编码蛋白序列和长非编码序列信息。富集后的RNA经片段化，反转录并扩增为双链cDNA，末端修复后末端加‘A’，再连接Adapter/Index，最后进行PCR扩增和片段筛选，经纯化后完成文库构建。我们会对文库进行QC，符合要求的文库方可上机测序。建库流程整体类似，不同文库类型在建库细节方面可能会有所不同。

　　

　　提交符合要求的样品是文库构建成功和获得高质量测序数据的关键，因此请确保您的样品符合纯度、浓度要求。如因样品问题而建库失败将影响您样品的实验进度。

　　

　　如果您需要二代RNA建库测序服务，请确定您的样品：

1. 我们只接收纯化提取好的RNA样品，请客户自行完成RNA提取等处理工作。
2. 所有样品须有NanoDrop OD 260/280值和260/230值、Qubit浓度定量。接收的RNA样品会在安捷伦5200 Fragment Analyzer上进行RNA质检：Total RNA样品检测完整度（RQN值）；其他RNA样品检测核酸大小。质检不通过（RQN值小于7或降解、DNA污染等情况）的样品将被退回。
3. 所有RNA样品都须DNA-free (可在胶图中检查是否有DNA污染)，溶于RNase-free洗脱液，置于1.5ml低吸附离心管中用封口膜封好，用记号笔或标签清晰、准确地标记样品编号，内容应与《样品信息单》一致。
4. 请在《样品信息单》中准确填写样品浓度、体积、建库类型等信息。
5. Total RNA建库最低起始量100ng，体积最少15μl；其他RNA样品最低起始量10ng，体积最少10μl。

　　

　　核酸定量均以Qubit定量为准，如为NanoDrop定量，则需按两倍量提交。样本起始量越高，越有利于提高文库的多样性，在条件允许情况下，请尽量多提交样本。Total RNA应完整性良好，无蛋白质，无肉眼可见的杂质污染，琼脂糖凝胶图中，应有清晰的 18S、28S 条带，Bioanalyzer 2100或Fragment Analyzer 5200质检，RQN值应大于7，小于7的降解样品建库会影响文库的多样性甚至建库失败。RNA的NanoDrop OD 260/280比值应在1.8和2.1之间，260/230比值应高于1.5。

　　样品如需长期保存，请置于-80℃低温冷冻箱内。为防止样品降解对测序产生影响，我们接受的 RNA 样品冻存时间建议不超过一个月。运输中请使用足量的干冰，并选用较快的运输方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。