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高速流式细胞分选

   流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它通过激光激发流动溶液(鞘液)中的单个颗粒或细胞的荧光信号,快速的定性、定量分析细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并且根据参量范围将特定的细胞亚群分选出来。

  BD FACS Aria SORP(Special Order Research Product)是特殊定制的超高速流式分选系统,基于石英杯激发的设计,采用固定调校光路,具备完善自动质控。该设备拥有5激光18参数的检测能力,具有极高的分选速度、纯度和活性,适合各种培养细胞系、原代细胞、组织样本等众多类型样本的分选。

  

  如果您需要流式服务,请您确定:

  1、单细胞悬液样品(推荐使用0.1-1.0%BSA-PBS溶液重悬样品),上机前使用200目滤网过滤(推荐BD滤网),禁止使用含血清的培养基或PBS溶液。

  2、无菌制备,避免样品带菌对设备造成污染,进而影响其他用户的无菌分选实验。

  3、根据您的样本种类和选择的荧光标记物,与仪器管理人员沟通确认所使用荧光滤光片和喷嘴直径。

  4、另需要准备:收集管或收集板(可以加入少量培养基或buffer),上样缓冲液或者PBS(可能需要稀释样品)。

  5、请您提供邮箱以接收实验结果和账单信息。

  

  注意事项:

  1、样品浓度

  样品浓度由分选目的细胞在总细胞群中的百分率,以及分选的回收率决定。

  例如:如果需要收集1X105个细胞,而细胞仅占总细胞的10%,则准备的样品细胞数量至少需要1x106。如果样品细胞是转染细胞,需要考虑的除了转染效率,还有荧光信号弱的细胞所占比率。

  样品里有溶解的DNA会导致单细胞凝集成团,使得分选目的细胞与非目的细胞粘连,导致分选纯度降低,回收率降低。可以在样品中加入少量DNA酶,或在上样前通过各种孔径的BD滤网(100目 - 400目)过滤样品。

  2、 安全性问题

  由于在分选过程中,样品可能通过液滴震荡产生气溶胶,所以不接受会传播人类病原菌的生物有害样本,也不接受含放射性生物样品。

  3、喷嘴直径

  仪器常用喷嘴直径为85um,所分选细胞的直径最好小于喷嘴直径的1/5,至少小于1/3。细胞的形态也会影响分选的结果,理论上越接近于球形的细胞,分选过程中的剪切力对细胞造成的伤害越小。形态特殊的细胞应选择较大的喷嘴,以减轻分选过程对细胞造成的伤害。

  如果所分选的细胞直径较大,需要更换喷嘴,请事先与管理员沟通。

  4、 荧光染料

  串联染料(PE-Cy7、APC-Cy7、PerCP-Cy5.5、PE-Texas Red等)在暴露于光或甲醛下时容易降解,可能会影响分选结果。

  5、分选精度

  BD FACS Aria SORP提供4种分选模式,可供不同实验需求参考:

分选模式

优点

缺点

Purity

分选纯度高

分选效率受影响 (通常 <80%)

Yield

分选效率最高,100%

分选纯度低(<90-95%),影响低表达细胞的分选

4 Way Purity

纯度与“Purity”精度相同,但远侧流的聚焦效果更好

效率有时比“Purity" 模式略低

Single Cell

分选到孔板中(也可用于收集管分选)

大量丢失目的细胞